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【原创】活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的
活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的应用 图1 CFDA-SE的工作原理（示意图）
Fig 1 Working principle of CFDA-SE
（下图为作者用coreldraw 软件制作，版权所有）
（缩略图，点击图片链接看原图） 1 材料和方法 谢谢！ 费用如何？ 好啊，我自己都没有PDF格式，那你发上来吧。
谢谢！
TCR wrote:
好啊，我自己都没有PDF格式，那你发上来吧。
谢谢！
eeflying wrote:
费用如何？
再次感谢TCR的文章 2 结果
2.1 CFDA-SE标记细胞刺激后荧光强度变化 培养24 h后，各组细胞的荧光强度较0 h有所降低（平衡过程），各刺激组与对照组相比较，FL1无明显差异，在直方图上均表现为单峰。培养48 h后，PDB＋Ion组和ConA组FL1均出现明显的子峰；而ConA+CsA组与对照组仍为单峰，各组直方图及anti-CD3－PE mAb染色后的散点图见图2。
图2 各组淋巴细胞培养48 h后的荧光强度
Fig 2 Fluorescence intensity of lymphocytes in each group after culture of 48 h
Histogram and corresponding dot plot stained with anti CD3-PE in FL2-H.
（缩略图，点击图片链接看原图） 2.2 ConA刺激后各T细胞亚群荧光强度的变化 培养48 h后，CD4+和CD8+T细胞的分裂已出现不同步现象，而培养72 h后这一现象更加明显（图3）。
图3 ConA刺激后各T细胞亚群的荧光强度
Fig 3 Fluorescence intensity of T cell subsets afer ConA stimulation
A :48 h; B: 72 h.
（缩略图，点击图片链接看原图） 2.3 ConA刺激后各T细胞亚群荧光强度的变化 培养48 h后，CD4+和CD8+T细胞的分裂已出现不同步现象，而培养72 h后这一现象更加明显（图3）。
图4 ConA刺激72h后各亚群T细胞的增殖动力模型
Fig 4 Proliferation kinetics model of T subsets after ConA stimulation for 72 h
screen.width-333)this.width=screen.width-333" width=640 height=168 title="Click to view full fig3 复制.gif (683 X 180)" border=0 align=absmiddle> 表1 ConA刺激72h后各亚群T细胞增殖的相关指数
Tab 1 Related indexs of proliferation of T subsets after ConA stimulation for 72 h
（n=4,`x ±s）
Index CD4＋T CD8＋T CD3＋T
Parent 15.09±1.12 4.40±0.55b 10.14±0.83
G2 11.62±1.75 5.49±0.60b 9.28±0.66
G3 26.33±2.35 13.49±1.96b 21.67±2.15
G4 27.99±2.42 35.33±2.04b 28.72±2.76
G5 17.66±2.33 40.70±2.17b 32.45±2.25
G6 0.11±0.03 0.20±0.04a 0.17±0.04
PF 0.55±0.05 0.73±0.05b 0.60±0.06
PI 3.11±0.33 5.87±0.35b 3.92±0.30
Parent: Percentage of parent cells (%); Gn: Percentage of different generation cells (%)；aP＜0.05, bP＜0.01 vs CD4＋T.
3 讨论
本研究中PDB+Ion和ConA引起的淋巴细胞增殖，以及CsA对ConA的增殖抑制作用，均能以CFSE荧光的改变表现出来，而且CD8+ T细胞与CD4+ T细胞对ConA刺激的反应性差异也显而易见。通过ModFitTM (proliferation analysis for cell tracking)软件的拟合，又可得到多项增殖相关指数，实现了对淋巴细胞增殖研究的可视化与数量化，这是传统检测增殖的方法所无法比拟的，或者需要大量的工作才能取得类似的结果。CFDA-SE标记已被证实，其与标准的增殖分析技术，如3H-TdR[2]和BrdU标记[1, 3] 有明显的相关性，但它同时可提供更高水平的信息。例如 ①传统的方法通常是在群体水平上检测增殖，当整个细胞群分裂1次时所掺入的3H-TdR量与三分之一的细胞分裂2次是相同的，而且这些技术只能局限于体外实验；而CFSE技术能够检测免疫反应的动力学变化，体内或体外追踪某个亚群的细胞增殖，对研究细胞分化所必需的标志或与细胞分裂有关的细胞内蛋白具有重要意义。②这项技术可通过流式细胞仪的分选，将所需的分裂不同代数的活细胞回收，以便进一步研究这些细胞的功能。③无论是MTT比色法、3H-TdR 掺入法，还是BrdU标记法，都只能对活细胞进行检测，忽视了某些细胞已经分裂又发生死亡的可能性；而使用CFSE标记，死亡的细胞将在几天内保持荧光强度基本不变，同时可使用其它染料将其区分开来，为增殖分析提供了更加全面的资料。阅读本文的人还阅读：
作者:admin@医学,生命科学 2010-12-12 06:42
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