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利用DMBA—DNA复合体体外模型探讨中医食疗防癌作
近二十年来，癌的早期诊断及治疗虽已取得很大成果，但癌的发病率及死亡率仍在逐年上升。癌的一级预防（病因学预防）即从人的生存环境中消除各种致癌因素虽然理想，但难以实现。实践证明，癌的二级预防（即阻断、干预致癌因素的影响）是可行的。故美国NCI于1992年成立了化学预防与控制部，着重进行天然食物及植物的二级预防效果研究。现已证明，许多癌症能够被合理的膳食所预防，因为天然植物中包含许多抗致癌成分，如多酚类、黄酮类、胡萝卜素类等25类成分。目前，对中药抗癌作用研究多局限于治疗癌症及提高机体免疫力方面，对中药特别是食疗中药防癌作用研究基本上处于空白状态。
癌症预防是近年来世界各国一个倍受重视的大课题，许多发达国家近年逐渐增加对这个领域研究的资助。而中医食疗是祖国医学未受到应有重视的一个急待挖掘的宝库，内含丰富，将中医食疗应用于癌症的预防，是我国具有特色优势的很有前途未受到应有的重视的研究领域。本项目旨在首创一种适合于中药体外的微量快速防癌评价方法，并将其应用于于中医食疗基础性研究，立题新颖，正确可行，该项研究成果将填补中医食疗领域这方面研究的空白，筛选出的高效防癌食药对进一步开发防癌保健食品是很有裨益的。
随着人民生活水平的提高，中医食疗保健品正逐渐成为社会化、商品化。但传统的食疗保健品，因对其作用机理很不清楚，致使一些有效成份损失严重，降低了其保健疗效。中医食疗是中医药学一个未受到应有重视的一个分支学科。数千年来，在防病治病方面起了重要的作用。为使这一宝贵遗产永盛不衰，发扬光大，必须利用科学技术阐明其科学依据，提高其使用的可靠性。食疗防癌机制非常复杂，主要机制包括阻止化学致癌物与DNA共价结合酶活性的修饰、抗氧化及促进DNA修复。近年来，越来越多食疗中药疑具有防癌作用，但现有的的经典抗致癌作用评价方法一般采用动物和临床试验完成，费时约需2年左右，并且需消耗大量的人力物力。因此，迫切需要建立一种微量、快速、可靠的体外方法来评价其抗致癌作用。
食药的防癌作用多局限于癌症起始阶段。现已知的化学致癌的起始过程为致癌剂与DNA形成复合体。当体内对化学致癌剂脱毒能力下降时，导致致癌剂活化，从而形成DNA与致癌剂的复合体。二甲基苯蒽（7,12-dimethylbenezanthrancene,DMBA）为已经广泛应用于评价食药抗癌作用的致癌剂。DMBA通过代谢活化成DMBA-3,4,-diol与DNA发生共价结合，导致碱基对置换，从而引起复制过程中错配，导致了肿瘤的起始过程。本课题申请人在美国进修的Milner实验室业已证明，动物体内DMBA-DNA复合物量与肿瘤发生率成正比。去年在美研究亦初步发现，某种成份若能在体外抑制酶促DMBA-DNA复合体形成，该成份可能具有抗致癌作用。
过去几年国外大量研究表明，脂质氧化酶（Lipoxygenase,LOX）和环氧化酶（Cyclooxygenase,COX）催化的产物对癌症的发生发展起着至关重要的作用，这一类酶的抑制剂被认为是“新型的”“神奇的”防癌剂。鉴于上述理由，本项目拟以LOX和COX为催化酶、活化的DMBA为致癌剂，来探讨食疗药物抑制DMBA-DNA复合体形成，以期建立一种微量、快速、可靠的体外方法来筛选防癌食药，并对其防癌机理进行探讨，为中医食疗提供实验依据。
一、本研究拟首先建立起一种体外快速评价防癌模型
1、反应体系建立：以不同类型脂质过氧化酶、环氧化酶为催化酶、亚麻油酸为反应底物，催化活化的DMBA-3，4-diol与牛胸腺DNA（CT-DNA）在不同缓冲体系（KPO4 或PBS）中结合形成稳定的共价结合物。
2、探讨反应体系中反应时间、酶的用量、CT-DNA量与DMBA-DNA复合物量关系，找出最佳反应体系和时间。
3、DMBA-DNA复合物经提取纯化后，用P 1核酸酶富集，32P作探针 TLC法分离、鉴定和定量不同种类DMBA-DNA复合物。将此复合物图谱与DMBA所致SD大鼠乳癌细胞中所提取的复合物图谱进行比较。
二、利用体外模型，进行食药防癌作用筛选
中医食疗是以中医理论为指导，并按照中药的性味功能与适宜的食物相配合，并配以调味料组成，因此本项目拟对常用于中医食疗的食物、中药和调味料分别进行防癌作用筛选，选出高效防癌食物。
1、食物：粮食类（黄豆、黑豆、刀豆、番薯、洋芋、芝麻等）蔬菜类（菠菜、番茄、胡萝卜、丝瓜、苦瓜、香菇、木耳、藕、花菜、地瓜等）果实类（葡萄、胡桃仁梨、桃、柿子、荔枝等）。
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作者:admin@医学,生命科学 2011-03-30 15:14
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