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猪链球菌Ⅱ型流行菌株同源性分析

【摘要】 目的 检测不同来源的猪链球菌Ⅱ型菌株间的同源性。方法 利用抗生素敏感性试验（K-B 法）和基因指纹图（ genomic　fingerprinting ）对分离到的4株猪链球菌Ⅱ型(Streptococcus suis Ⅱ)进行同源性比较。结果 4株菌株的耐药谱基本相同，基因指纹图分析的结果，在12.4kb、10.9kb、8.4kb、6.8kb、6.4kb、5.5kb、4.9kb、4.5kb、4.1kb、3.8kb、3.6kb和3.4kb等处分别出现完全一致、清晰明显的条带。结论 这4株猪链球菌Ⅱ型菌株具有较高的同源性，其中3株分离自病猪，1株分离自患者血液，提示可能来自同一个感染源，由该菌先在猪群中造成流行，再感染有密切接触史的人，造成该地区的暴发流行。
【关键词】 猪链球菌Ⅱ型 基因指纹图 同源性
The homogeneity analysis of Streptococcus suis Ⅱ Dong Deping, Han Lizhong, Xiang Mingjie Yu Yinkun ,Ni Yuxing. Dept. of Clinical Laboratory, Ruijin Hospital Shanghai No.2Medical University,Shanghai 200025
【Abstract】 Objective To examine the homogeneity among 4 isolates Streptococcus suis Ⅱ. Methods Compared the homogeneity of these strains by antibiotics susceptibility test (K-B method) and genomic fingerprints. Results 4 strains appeared identical resistant profiles and showed same bands in 12.4kb、10.9kb、8.4kb、6.8kb、6.4kb、5.5kb、4.9kb、4.5kb、4.1kb、3.8kb、3.6kb and 3.4kb. Conclusions There were higher homogeneity in the strains of Streptococcus suisⅡ. Maybe this type of Streptococcus suis was the epidemical strain of this district.
【Key words】 Streptococcus suisⅡ Genomic fingerprinting homogeneity

今年七、八月间，我国南方某地区发生了一起由猪链球菌Ⅱ型引起的暴发流行，造成大量疫猪死亡，并引起数个接触病猪的屠宰人员的感染，甚至死亡[1]。本研究在成功地从患者和病猪中分离到的4株猪链球菌Ⅱ型的基础上，通过细菌耐药谱和基因指纹图谱技术对这4株猪链球菌Ⅱ型进行了同源性分析，以追踪传染源，了解该菌流行的原因和传播媒介。

材料与方法
一、材料
1、菌株来源 共4株，其中1株从患者血液中分离，其余3株从不同病猪中分离。
2、主要试剂及配制
1）抗生素敏感试验纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司。
2）溶菌酶、RNA酶、蛋白酶K和DNA限制性内切酶HaeⅢ购自上海生工生物工程有限公司。
3）溶液Ⅰ：含20mmol/L Tris-HCl（pH6.9），1.11mol/L葡萄糖，1mmol/L MgCl2。
4）缓冲液：取溶液Ⅰ 4份，0.5mol/L EDTA（pH8.0）1份，1mol/L Tris-HCl（pH8.0）1份，临用时加入溶菌酶（2mg/ml）和RNA酶（20μg/ml）。
3．主要仪器：FH-2002复华凝胶图象分析系统（上海复华生物医学工程有限公司）。
二、方法
1、抗生素敏感试验 按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）标准，采用纸片扩散法（K-B法），标准质控菌株为金黄色葡萄球菌（ATCC 29213）。
2、DNA抽提和分析 挑取单个菌落接种于2ml LB培养基中，37℃培养24小时，取0.5ml转种于30ml LB培养基，37℃摇床培养24小时，10000g离心去上清，用2mol/L NaCl洗一次，蒸馏水洗二次。将沉淀重悬于0.8ml缓冲液中，37℃孵育1小时，加入终浓度为1%SDS和100μg/ml蛋白酶K，55℃孵育3小时，加入等体积酚-氯仿抽提液，轻轻颠倒混匀，10000g离心取上清液相，再加入等体积酚-氯仿抽提一次，上层液相加入两倍体积冷无水乙醇，置-20℃过夜，离心，沉淀物用70%乙醇洗一次，自然干燥后，用TE（10mmol/L Tris-HCl、0.1mol/L EDTA，pH8.0）溶解并测定DNA浓度。抽提的DNA用HaeⅢ酶切（按厂家说明书操作），酶切产物在0.55%琼脂糖中，30V电压电泳17小时。

结 果
1、抗生素敏感试验 结果显示4株猪链球菌Ⅱ型对苯唑西林、氨卞西林/舒巴坦、头孢唑啉、头孢克罗、头孢曲松、氧氟沙星、万古霉素、红霉素、克林霉素和头孢西丁均敏感，对环丙沙星为中介，对阿米卡星和青霉素均耐药。具体结果见表。


表1 4株菌株药敏试验结果(抑菌圈直径 单位：mm)
No.1 No.2 No.3 No.4
阿米卡星 8 6 6 6
青霉素 27 26 28 27
苯唑西林 13 13 13 14
氨卞西林/舒巴坦 32 32 32 29
头孢唑啉 30 28 28 31
头孢曲松 31 31 31 30
氧氟沙星 19 18 18 18
环丙沙星 20 20 20 19

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作者:admin@医学,生命科学    2010-11-04 05:11
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