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survivin、CD34、PCNA在大肠癌中的表达
Survivin、血管内皮生长因子在大肠癌中的表达及与血管生成的关系
[摘要] 目的 探讨survivin、血管内皮生长因子(VEGF)在大肠癌中的表达及与血管生成的关系。 方法 采用原位杂交方法和免疫组织化学方法，检测46例大肠癌，22例大肠腺瘤和10例正常大肠粘膜中survivin mRNA和VEGF蛋白的表达以及微血管密度（MVD）。 结果 大肠癌组织表达survivin mRNA(67.4%)和VEGF(69.6%),显著高于大肠腺瘤(均为31.8%)和正常组织(分别为0%,10%)(p均<0.05)。survivin mRNA的表达与患者的性别、年龄、癌肿的大小和分化程度无明显相关关系，与VEGF的表达和微血管密度显著相关（p<0.05）。VEGF表达阳性的大肠癌组织中的MVD显著高于VEGF阴性表达者。 结论 （1）survivin、VEGF在大肠癌组织中表达上调，提示其对大肠癌的发生起重要作用。（2）survivin和VEGF的表达可能在癌变和血管生成过程中起协同作用。
[关键词] 大肠癌；survivin; 血管内皮生长因子；微血管密度
[Abstract] Objective To study tissue expression of survivin mRNA and vascular endothelial cell growth factor(VEGF) and their relationship with angiogenesis in colorectal tumorigenesis . Method Expresson of survivin mRNA was detected by in situ hibridization in 46 cases of colorectal carcinoma(CRC), 22 cases of colorectal adenoma and 10 cases of normal colorectal mucosa . Immunohistochemical staining was to detect the expression of VEGF and microvessel density( MVD) . Results There were significantly higher positive rates of survivin mRNA (67.4%) and VEGF(69.6%) in colorectal cancer than colorectal adenoma (31.8% for both) and normal colorectal mucosa (0%、10% respectively) (p<0.05) . The expression of survivin mRNA correlated with VEGF expression or MVD (p<0.05), but not with age , sex , size or differentiation . MVD was significantly higher in VEGF-positive CRC than in VEGF-negative CRC . Conclusion (1) The up-regulation of survivin and VEGF suggested that they may be involved in the pathogenesis of colorectal cancer . (2) survivin and up-regulation of VEGF may play synergetic role in the carcinogenesis and angiogenesis of colorectal cancer .
[Key words] colorectal cancer ; survivin ; VEGF ; microvessel density
机体内环境的稳定依赖细胞增殖和调亡之间的动态平衡，二者失衡将导致细胞寿命异常延长，突变基因积累，细胞调控因子分泌异常，从而引起血管生成和肿瘤。Survivin是最近发现的一种凋亡抑制蛋白（IAP），选择性表达于常见恶性肿瘤，可直接抑制caspase-3和caspase-7的活性[1]。血管内皮生长因子（VEGF）是肿瘤血管生成调控中效力最强的正性调控因子，与肿瘤新生血管的形成、肿瘤生长、转移密切相关。有关survivin与大肠癌关系的研究较少，其与VEGF、微血管密度(MVD)的关系国内外尚未见到报道。我们采用原位杂交方法检测了大肠腺癌、大肠腺瘤和正常大肠粘膜中survivin mRNA的表达，并与VEGF、MVD免疫组织化学的结果进行相关分析，以探讨survivin、VEGF在大肠癌发病机制中的作用，及与血管生成的相关关系。
材料与方法
一、 材料
标本取自郑州大学第一附属医院2001年9月~2002年11月肠镜活检标本78例，其中大肠腺癌46例，大肠腺瘤22例，正常大肠粘膜10例。46例大肠腺癌中，男26例，女20例，年龄34~74岁。所有标本均经病理证实。所用新鲜标本经4%多聚甲醛/0.1MPBS固定，石蜡包埋，常规制成4um厚切片。
二、 方法
1、主要试剂
survivin原位杂交试剂盒购自武汉博士德公司，鼠抗人VEGF单克隆抗体、鼠抗人CD34单克隆抗体均为Santa Cruz公司产品，SP试剂盒、DAB显色剂均购自北京中山生物技术公司。
2、原位杂交方法
切片常规脱蜡至水化，滴加新鲜配置0.5%H2O2/甲醇室温处理30分钟以灭活内源性过氧化物酶，滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶，37℃消化15~30分钟以暴露survivin mRNA核酸片段，滴加预杂交液，恒温箱37℃24小时，吸取多余液体，滴加杂交液，恒温箱40℃杂交过夜，梯度SSC洗涤，依次滴加封闭液，生物素化鼠抗地高辛，SABC,DAB显色，苏木素复染。脱水，透明，封片。PBS液代替杂交液做阴性对照。
3、采用链霉卵白素-过氧化物酶复合物（SP）法。石蜡切片脱蜡至水，3% H2O2孵育20分钟，高压抗原修复，正常山羊血清封闭，滴加1：75的一抗VEGF、CD34，4℃过夜，依次滴加生物素标记二抗，辣根酶标记链霉卵白素工作液，DAB显色，苏木素复染。酒精脱水，二甲苯透明，封片。常规抗体稀释液代替一抗作为阴性对照。
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作者:admin@医学,生命科学 2011-03-14 17:11
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