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CCK-8检测OPG对巨噬细胞RAW的抑制实验(CCK-8 PK MTT)

CCK-8为dojindo公司细胞计数和细胞活性测定的一个试剂，一些用过的人效果不错。为了尝试这一方法，本人在试验的闲暇时间顺便做了一个小试验，尝试CCK-8的效果，先将结果与兄弟姐妹们分享。

实验步骤：
1．  细胞记数：取正处于对数生长期的RAW细胞，使用0.2%的胰蛋白酶消化,1000转离心5分钟后,使用常规红细胞记数板对于细胞进行计数，
2．  调整细胞,使96孔培养板中每孔加入100ul稀释后的细胞（每个浓度做3个平行样），使每孔含细胞数分别为为8.8*103 C3）内加入不含细胞的完全培液（作为空白）。
3．  37度,5%二氧化碳条件下,细胞培养箱内培养24小时。
4．  各孔加入10ul CCK-8，混匀，继续置于培养箱中。
5．  分别于1h，2h，3h，4h，检测OD450读数。
6．  采用MICROSOFT EXCEL软件进行做图分析.

实验结果：

本次实验所采用的细胞浓度按照操作程序中所使用的浓度范围设定（最低浓度为625个细胞/孔,略低操作程序中所建议的浓度范围）。由1h，2h，3h，4h，7h，8.5h，24h七个不同时间点所测图形可看出，不同浓度所测OD值在1~7小时内线性相关性较好（其操作程序所提供的时间范围在1~4h），其中尤以3h的时间点的线性相关性为最佳（R2=0.9991）。相同浓度所测OD值在低浓度孔内重复性较好，而在高浓度孔内离散的趋势略增大，而且随着培养时间的延长，其增大越明显. 培养时间超过24小时,高浓度孔的OD读数趋于饱和，导致（细胞标准曲线）线性关系丧失。

实验结论：
CCK-8kit可以代替以前常用的方法（如MTT）进行细胞浓度的测定.其方法较MTT法简单方便. [标签:content1][标签:content2]

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作者:admin@医学,生命科学    2011-02-14 18:21
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