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HCC侵袭相关标志物谱系研究（第一部分）
肝癌组织中侵袭相关标志物的表达
材料
病例标本的选取和采集
所用标本均取自医院1998年1月至1999年1月常规术后病理标本67例，其中肝细胞癌56例（均带有癌旁肝组织），肝细胞腺瘤6例，肝局灶性结节性增生5例。5例正常肝组织对照取自肝血管瘤患者。所有病例均经病理证实，按全国肝癌协作组制定的有关肝癌大体分型、组织学分型和临床病理分期规范对肝细胞癌进行严格的病理诊断。[6]将符合下列3个标准的肝癌视为高侵袭性：（1）.肿瘤直径大于3厘米；（2）.多个肿瘤结节或主瘤旁有卫星灶；（3）.肉眼或镜下癌栓。未完全符合上述标准的为低侵袭性肝癌。前者22例，后者34例。选取病例的详细临床及病理资料见表1。
所用试剂
1.抗体（所用6种抗体资料见下表）
抗体 来源 属性 克隆来源 产品编号 一抗效价 抗原修复 出品公司
E-cadherin 山羊 多克隆 N-20 SC-1500 1：100 微波修复 Santa Cruz
CD44v6 鼠 单克隆 17110183 MAB4073 1：50 微波修复 CII
nm23-H1 鼠 单克隆 NM301 SC-465 1：25 胰酶消化 Santa Cruz
PCNA 鼠 单克隆 PC10 M 0897 1：100 胰酶消化 DAKO
MMP-2 鼠 单克隆 CA-4001 MAB-0244 1：20 胃酶消化 MBI
TIMP-2 鼠 单克隆 T2-101 MAB-0238 1：20 微波修复 MBI
2.ABC试剂盒（VECTOR公司）
3.SABC试剂盒（博士德生物工程有限公司）
4.抗体稀释液0.05M TBS
5.漂洗液0.01M PBS（PH7.4）
6.0.3%H2O2-甲醇
7.抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01M，pH6.0±0.1）：
分别配制储存液—0.1M柠檬酸：21.01g柠檬酸溶于双蒸水，定容至1000ml；0.1M柠檬酸三钠：29.4g柠檬酸三钠溶于双蒸水，定容至1000ml。取9ml 0.1M柠檬酸溶液和41ml 0.1M柠檬酸三钠溶液混合，定容至500ml，即为工作液。[7]
8.消化液：0.05%胰蛋白酶/0.1%CaCl，0.4%胃蛋白酶/0.1M HCl
9.显色液0.03%DAB/0.05M TBS（PH7.6）临用前加入0.04% H2O2
10.防脱片剂APES（上海中达医学应用研究所 进口分装）
所用主要仪器
快速生物医学微波炉：CD-1型（上海创大科技有限公司）
隔水式电热恒温培养箱：PYX-DHS型（上海跃进医疗器械厂）
冰箱：上菱BCD-202W
表1.1. 56例肝细胞癌详细临床病理资料
序号 病理号 性别 年龄 表抗 AFP值μg/L 肿瘤大小cm 卫星灶 组织类型 分级 包膜 肝硬化 癌栓
1 982155 男 32 + 95.3 3.4´2.6,3.2´2.22.5´2,2.5´2.4 – 粗梁 II – 混 +
2 990054 男 36 + >1000 7.3´3.5,1.7´1.2 – 粗梁 III – 混 +
3 990050 男 55 + 11.7 3.5´3 + 团片 III = 混 +
4 990161 男 39 + >1000 4´3.2 – 团片 IV – 混 +
5 990133 男 52 + 5.7 2.5´2 – 团片 III = 小 +
6 990089 男 58 + >100 17.8´10.4 + 团片 III – 小 +
7 990004 男 40 + 533 9´6 + 粗梁 III – 混 +
8 990163 男 46 + 197.9 5.2´4.7,3.8´3 – 团片 IV = 混 +
9 990172 男 38 + >1000 16´11.7,2.5´2 + 粗梁 III – 小 +
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作者:admin@医学,生命科学 2011-04-27 05:11
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