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摘要
(─)-表儿茶酸（EC）是一种存在于绿茶中的黄酮类化合物，有人认为它具有预防癌症的作用。但是，对它的生物利用度还不是很清楚。在这次研究中我们考察了EC的结合代谢，主要是它的葡萄糖醛酸化及硫酸酯化。实验材料为人的肝脏和肠的微粒体和胞液，还有重组体UDP-葡萄糖醛酸转移酶（UGT）和硫酸转移酶(SULT)的同功酶，并将此结合代谢反应与大鼠的做了比较。令人惊讶的是在人肝脏和微粒体中，EC并不与葡萄糖醛酸结合，而且在人结肠微粒体中和重组体UGT1A7存在下也无二者结合的迹象。肝脏和肠中无重组体UGT1A7。有趣的是，在大鼠的肝微粒体中EC与葡萄糖醛酸很易结合，生成两种葡萄糖醛酸结合物。相反，在人肝脏胞液中，通过SULT1A1同功酶，EC很易形成硫酸酯结合物。在肠中，SULT1A1和 SULT1A3均发挥作用，而其它SULT同功酶很少发挥作用。在HPLC测定中，所有组织的硫酸酯结合物均显示出一个主要的硫酸酯酶-敏感峰。在肝和肠的胞液中SULT1A1存在下，还出现了一个附加的硫酸酯酶-拮抗小峰,而在Coca-2胞液中SULT1A3存在下并无此峰。在大鼠体内, EC与硫酸的结合较在人肝中慢得多。这些结果表明，在人的肝脏和肠中，形成硫酸酯结合物是EC的主要代谢途径，而没有葡萄糖醛酸结合物形成。此外，在人和大鼠体内, EC的葡萄糖醛酸化及硫酸酯化存在很大的种属差异。
茶在维持人体健康和对疾病的治疗中所充当的角色是很有趣的。(─)-表儿茶精（EC），(─)-表儿茶精-3-没食子酸盐，(─)-表没食子儿茶精-3-没食子酸盐，和(─)-表没食子儿茶精是存在于茶中具有上述有益作用的三种主要黄酮类化合物。对于动物（Stoner and Mukhtar,1995）和人体(Katiyar and Mukhtar,1996)它们均具有很强的抗癌作用。很长时间以来，人们都认为这是由于茶中黄酮类化合物能产生强烈的抗氧化作用(Salah 1995)。在最近的研究中，通过运用一系列细胞培养模型，证明了茶中黄酮类化合物对细胞繁殖、脱噬作用以及特殊信号转导都有影响，其中包括活化有丝分裂的蛋白激酶和细胞核因子-kB(Lin and Lin.1997;Morre et al.,2000;Chung et al.,2001;Yang et al.,2001)。
关于这些研究，最重要的是对茶中黄酮类化合物的口服生物利用度知之甚少。将茶中黄酮类化合物的各种制剂对受试者给药，并测定血浆中的浓度。结果表明，儿茶精确实到达了循环系统，但口服生物利用度很低(Lee et al.,1995;Nakagawa et al.,1997; Yang et al.,1998;Baba et al.,2000;Chow et al.,2001)。据最新报道，血浆、尿、粪中的儿茶精只占吸收的1.68%，而且与没食字酸结合的儿茶精的生物利用度较未结合型低(Warden et al.,2001)。对于大鼠，茶中黄酮类化合物的口服生物利用度也很低(Chen et al.,1997;Zhu et al.,2000)。其原因是在肠中吸收不好和/或在肝和肠中大部分被代谢掉了。
在以前的实验中，我们用人的肠Coca-2细胞系研究了肠上皮细胞对茶中儿茶精[即EC(图1)]的吸收。有趣的是，肠上皮细胞没有或者说只有微弱的吸收(Vaidyanathan and Walle,2001)。部分原因在于MRP2运载体。当MRP2运载体被MK-571抑制时，可以观察到EC的吸收，但是很少。这表明另一种因素（即代谢）有更大的决定性作用。尽管已有报道茶中黄酮类化合物的代谢包括葡萄糖醛酸化及硫酸酯化(Lee et al.,1995; Yang et al.,1998;Baba et al.,2000;Chow et al.,2001),但结合物被酶水解后所用的测定方法是间接的，所以并无分子特异性。另一方面，在大鼠体内已证明葡萄糖醛酸化是最重要的结合代谢途径(Harada et al.,1999；Okushio et al.,1999)。
在本次实验中，我们用人的肝脏及肠的微粒体和胞液，还有重组体UGT和SULT同功酶测定了EC与葡萄糖醛酸、硫酸的结合反应。同时我们也测定了大鼠对EC同种制剂的代谢，以此作为比较。
实验步骤
实验材料 EC（图1），(+)-儿茶精，槲皮素，UDPGA，牛肝β-葡萄糖醛酸酶，来自于产气气杆菌的硫酸酯酶，D-葡萄糖二酸1,4-内酯，丙四菌素，硫酸四丁基铵，三氟乙酸（光谱纯）购于Sigma-Aldrich (St.Louis，MO)。[35S]3′-磷酸腺苷5′-磷酸硫酸酯（PAPS）（1.0-1.5Ci/mmol）购于PerkinElmer Life Sciences，Inc.（Boston，MA）。人肝微粒体和胞液匀浆，人的肠微粒体匀浆，未诱导和Aroclor 1254-诱导的大鼠肝微粒体匀浆，人重组体UGT1A7和UGT1A10购于Gentest Corp.（Woburn，MA）。其它化学试剂均为分析纯。
组织的制备 人的结肠和肠组织购于National Disease Research Interchange（Philadelphia，PA）。结肠微粒体的制备如下：用玻璃刀将结肠粘膜刮下，在1.15%的KCl中进行匀化，然后，以100，000g离心，得到的小颗粒即是结肠微粒体。将此微粒体加入含10%甘油，1mM EDTA，20µM丁羟基甲苯和100M苯甲磺酰氟的磷酸盐缓冲液（PH 7.5）100 mM中重新混悬。大鼠肝的胞液来自三只雄性Sprague-Dawley大鼠（33~36天龄，Harlan Spague Dawley Inc.,Indianapolis,IN）。肝胞液的制备方法如下：将肝组织加入含250 mM蔗糖和3mM巯基乙醇的磷酸盐缓冲液（PH 6.5）5mM中，匀浆，然后，以100，000g离心，得到的上清液即为肝的胞液。人空肠胞液的制备如下：用玻璃刀将空肠粘膜刮下，匀浆，然后，以100，000g离心，得到的胞液即是（Sundaram et al.,1989）。
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作者:admin@医学,生命科学 2011-01-06 05:14
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